人胚腎細(xì)胞293T都有哪些應(yīng)用？

　　人胚腎細(xì)胞293T來源于以腺病毒5DNA進行轉(zhuǎn)化的腎細(xì)胞，適于滴定人腺病毒。細(xì)胞表達一種不尋常的由整聯(lián)蛋白beta-1亞基和玻聯(lián)蛋白alpha-v亞基組成的玻聯(lián)蛋白細(xì)胞表面受體。Ad5插入片段進行了克隆和測序，結(jié)果表明堿基1-4344插入到了19號染色體(19q13.2)。293細(xì)胞比較容易轉(zhuǎn)染，是一個很常用的表達研究外源基因的細(xì)胞株。293細(xì)胞的缺陷是生長過程中貼壁強度比較小。所以在實驗過程中容易流失，從而影響實驗結(jié)果。
 

　　人胚腎細(xì)胞293T用于納米Fe3O4/Cr(Ⅵ)復(fù)合物對大腸桿菌及人胚腎細(xì)胞的毒性研究。以Cr(Ⅵ)為典型重金屬污染物的代表，利用納米四氧化三鐵吸附水中Cr(Ⅵ)，選擇大腸桿菌E.coli和人胚腎細(xì)胞HEK293兩種不同層級的生物作為模型，研究磁性納米四氧化三鐵吸附Cr(Ⅵ)離子后的復(fù)合物對兩種生物產(chǎn)生的毒性效應(yīng)。本研究的濃度作用范圍如下:MNPs濃度為250μg/mL，Cr(Ⅵ)濃度分別為1、2、3μg/mL，MNPs吸附不同濃度Cr(Ⅵ)后的MNPs/Cr(Ⅵ)復(fù)合物，作用時間為24h。
 

　　1、本研究采用共沉淀法，合成了納米四氧化三鐵顆粒(MNPs)，并利用MNPs吸附水中的Cr(Ⅵ)，制備了MNPs/Cr(Ⅵ)復(fù)合物。研究發(fā)現(xiàn)，MNPs能夠有效的吸附水中的Cr(Ⅵ)離子;MNPs對Cr(Ⅵ)的吸附符合Langmuir模型。MNPs/Cr(Ⅵ)復(fù)合物呈球形，顆粒大小一致，分布均勻，單分散性好，性質(zhì)比較穩(wěn)定。
 

　　2、在本研究的濃度范圍和作用時間下，Cr(Ⅵ)對大腸桿菌E.coli具有明顯的毒性效應(yīng)，并且與Cr(Ⅵ)濃度呈劑量相關(guān)性。在Cr(Ⅵ)離子的作用下，E.coli的生長受到明顯的抑制，Cr(Ⅵ)能夠引起E.coli內(nèi)活性氧顯著升高，并導(dǎo)致氧化損傷，使細(xì)胞結(jié)構(gòu)嚴(yán)重受損。MNPs及MNPs/Cr(Ⅵ)復(fù)合物對E.coli沒有顯著的毒性效應(yīng)。
 

　　與空白組比較，生長曲線沒有出現(xiàn)明顯的變化，在MNPs、MNPs/Cr(Ⅵ)復(fù)合物作用下，E.coli內(nèi)活性氧略微升高，但并未導(dǎo)致明顯的氧化損傷。通過透射電鏡觀察到僅有少量的MNPs、MNPs/Cr(Ⅵ)復(fù)合物吸附在大腸桿菌的表面，但細(xì)胞膜的通透性及細(xì)胞結(jié)構(gòu)沒有發(fā)生明顯變化。MNPs/Cr(Ⅵ)復(fù)合物在LB培養(yǎng)基中都是帶負(fù)電的顆粒，且水合粒徑都在200nm左右，導(dǎo)致MNPs/Cr(Ⅵ)復(fù)合物沒有進入到大腸桿菌細(xì)胞內(nèi)，僅有少量的MNPs/Cr(Ⅵ)復(fù)合物吸附在大腸桿菌表面，盡管產(chǎn)生了少量的活性氧，但不足以導(dǎo)致細(xì)胞代謝失衡。因此，MNPs及MNPs/Cr(Ⅵ)復(fù)合物對E.coli沒有產(chǎn)生明顯的毒性效應(yīng)。
 

　　3、在本研究的濃度范圍和作用時間下，Cr(Ⅵ)對人胚腎細(xì)胞HEK293的毒性效應(yīng)顯著，并且與Cr(Ⅵ)濃度劑量相關(guān)。在Cr(Ⅵ)離子的作用下，細(xì)胞的形態(tài)和密度都發(fā)生了顯著變化，細(xì)胞活力明顯下降，同時引起細(xì)胞內(nèi)活性氧顯著升高，導(dǎo)致氧化損傷，并誘導(dǎo)了細(xì)胞的凋亡。在MNPs、MNPs/Cr(Ⅵ)復(fù)合物的作用下，與空白組相比，細(xì)胞的形態(tài)、密度和細(xì)胞活力均沒有出現(xiàn)明顯的變化。
 

　　MNPs吸附Cr(Ⅵ)后，顯著降低了Cr(Ⅵ)對HEK293細(xì)胞誘導(dǎo)產(chǎn)生的破壞作用，MNPs/Cr(Ⅵ)復(fù)合物沒有引發(fā)細(xì)胞的氧化損傷，證實了細(xì)胞膜和細(xì)胞結(jié)構(gòu)沒有受到明顯的破壞。在DMEM培養(yǎng)基中，由于MNPs/Cr(Ⅵ)復(fù)合物的水合粒徑基本都在200～400nm之間，且表面電荷都是帶負(fù)電，導(dǎo)致絕大多數(shù)的復(fù)合物不能進入細(xì)胞內(nèi)，MNPs/Cr(Ⅵ)復(fù)合物在HEK293細(xì)胞內(nèi)的攝取量極小，這些顆粒是從細(xì)胞外通過質(zhì)膜內(nèi)陷形成囊泡進入細(xì)胞，但沒有進入到細(xì)胞核中，在正常代謝途徑下不會導(dǎo)致細(xì)胞的凋亡。因此，MNPs及MNPs/Cr(Ⅵ)復(fù)合物對HEK293細(xì)胞沒有顯著毒性效應(yīng)。